實驗原理小鼠骨髓細(xì)胞有高度的分裂活性,并且數(shù)量非常多,因此不必進(jìn)行體外培養(yǎng),可直接觀察到分裂期細(xì)胞.

　　處于分裂期的細(xì)胞經(jīng)秋水仙素處理,阻斷紡錘絲的形成,使細(xì)胞分裂停止于中期,此時染色體達(dá)到大收縮,具有典型的形態(tài).低滲處理使細(xì)胞破裂,便于染色體分散.

　　ATCC和CMCC的菌種的區(qū)別跟聯(lián)系?

　　CMCC是中國醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心的縮寫,ATCC是美國典型菌種保藏中心的縮寫.

　　由于菌種保藏單位不同,他們所收藏的菌株也會不同,所以兩種菌是無法用同一名稱統(tǒng)一起來的.做分子生物和微生物實驗有時可以不考慮兩者的區(qū)別,只要該菌能滿足實驗需要,但做檢驗就必須按什么標(biāo)準(zhǔn)就用什么菌株.

　　ATCC菌種用什么復(fù)溶

　　用培養(yǎng)基可能會造成不必要的干擾,有什么緩沖液可以代替或是用生理鹽水嗎?購買的ATCC標(biāo)準(zhǔn)株一般都是細(xì)菌的液體培養(yǎng)物經(jīng)低溫真空凍干,可在培養(yǎng)物中加入幾滴該菌的液體培養(yǎng)基,混均后接種到固體平板或液體培養(yǎng)基中.

　　菌種到底是個什么東西呀?相信大家應(yīng)該都沒有聽說過,或許極少數(shù)人會知道,那么菌種是如何培養(yǎng)出來的想必大家都不是很清楚,它的培養(yǎng)條件又是怎樣的呢?為了幫助大家能更好的了解菌種,下面就為大家講講菌種的培養(yǎng)條件.

　　1.培養(yǎng)條件和菌齡實踐證明,采用適培養(yǎng)基和適保藏溫度進(jìn)行保藏,可提高微生物的存活率,延長菌種保藏期.研究表明,處于穩(wěn)定期的細(xì)胞或成熟的孢子對不良環(huán)境具有較強(qiáng)的抗性,因而,保藏非芽胞細(xì)菌和酵母菌,應(yīng)采用對數(shù)末期或穩(wěn)定初期的細(xì)胞.而保藏芽胞細(xì)菌、放線菌和霉菌,要用成熟的孢子.

　　2.菌種懸液的濃度為了保證菌種保藏期間具有一定的存活細(xì)胞,往往將保藏微生物的細(xì)胞濃度增大.一般要求細(xì)菌細(xì)胞和放線菌孢子的濃度?108/ml,酵母菌細(xì)胞和霉菌孢子的濃度>107/ml.液氮超低溫冷凍、真空干燥和真空冷凍干燥過程中,高濃度細(xì)胞可降低每個細(xì)胞暴露在介質(zhì)中的面積,從而增強(qiáng)了抗冷凍和抗干燥的能力,提高了細(xì)胞的存活率.

　　3.保護(hù)劑采用液氮超低溫冷凍、真空干燥和真空冷凍干燥保藏菌種,保護(hù)劑的選擇是提高微生物冷凍或干燥存活率,延長菌種保藏期的關(guān)鍵因素.保護(hù)劑分為低分子保護(hù)劑(低聚糖類、醇類、緩沖鹽類、氨基酸和維生素類)和大分子保護(hù)劑(蛋白質(zhì)和多肽類、多糖類).不同微生物菌種所適宜的保護(hù)劑不同,必須通過試驗篩選而確定.

　　4.凍結(jié)速度在液氮法和凍干法保藏菌種的過程中,凍結(jié)速度是影響微生物存活率的重要因素.研究表明,真核微生物菌種適宜慢速凍結(jié),而原核微生物菌種經(jīng)慢速凍結(jié)和快速凍結(jié)后,細(xì)胞存活率差異不顯著.我國菌種保藏一般采用三種方法:斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、冷凍干燥保藏法.對放線菌還另有沙土管保藏法,對絲狀真菌另加麩皮保藏法.的美國典型菌種保藏中心(ATCC),采取兩種有效的保藏方法,即保藏期一般達(dá)5--15年的冷凍干燥保藏法和保藏期一般達(dá)20年以上的液氮保藏法,以達(dá)到大限度減少傳代次數(shù),避免菌種退化.當(dāng)菌種保藏機(jī)構(gòu)收到合適菌種時,先將原種制成若干液氮保藏管作為保藏菌種,然后再制成一批冷凍干燥管作為分發(fā)用.經(jīng)5年后,若代(原種)的冷凍干燥保藏菌種已分發(fā)完畢,就再打開一瓶液氮保藏原種制成一批冷凍干燥管作為分發(fā)用.這樣,至少在20年內(nèi),凡獲得該菌種的用戶,至少只是原種的第二代,可以保證所保藏的分發(fā)菌種的原有性狀.

　　5.保藏條件根據(jù)菌種保藏的目的和原理,盡量采取低溫、干燥、避光和真空密封等綜合技術(shù)措施和條件保藏菌種,以利于菌種保藏期的延長.

　　6.恢復(fù)培養(yǎng)處于液氮冷凍狀態(tài)的菌種恢復(fù)培養(yǎng)時,通常采用38℃--40℃快速升溫解凍,因為慢速升溫解凍有可能出現(xiàn)胞內(nèi)再結(jié)冰,造成胞內(nèi)冰晶增大而傷害細(xì)胞.